Na+,K+—ATPase的测定方法

来源：百度文库 编辑：神马文学网 时间：2024/06/13 09:39:18

 

Na+,K+—ATPase的测定方法。  

    1. 比色法  其基本原理是三磷酸腺苷(ATP)经ATPase的催化水解，成为二磷酸腺苷(ADP)和无机磷酸。通过测定所生成的无机磷酸的量，可间接测定ATPase的活性。Na+, K+-ATPase可被G-毒毛旋花苷(ouabain)抑制，先测出总ATPase活性，再测出用毒毛旋花苷-G抑制的ATPase活性，两者之差即为Na+,K+—ATPase活性。

    此法一般实验室均可进行，其灵敏度有时难以满足研究的需要。因为，无机磷酸是在酸性条件下，与钼酸试剂生成磷钼酸，磷钼酸经还原后可形成钼兰，按颜色有深浅，在660nm处比色测定，计算无机磷酸的量。   

    2. 生物发光法  其原理是利用ATP、虫荧光素和虫荧光素酶形成腺苷酸—虫荧光素酶复合物而发光，其生物发光强度与ATP浓度成正比。当反应液中，ATPase与ATP作用—定时间，测定ATP的消耗量，即测出ATPase活性。同时测定经C—毒毛旋花苷抑制Na+ ,K+-ATPase后的剩余ATPase活性，两者之差即是Na+ , K+-ATPase的活性。   

    生物发光法的灵敏性和准确性均高于比色法，它可测出ATP的nmol／L级浓度，但需要一定的仪器设备，如生物发光计或液体闪烁计数仪。

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